Выделение и очистка нуклеиновой кислоты – очень важный этап в молекулярно-биологических исследованиях, ведь от ее качества и чистоты зависит достоверность анализа. С каждым годом появляются все более надежные и эффективные методики экстракции, позволяющие сделать тест ДНК максимально точным и доступным по стоимости.

В настоящее время практикуют выделение ДНК при помощи диоксида кремния (силики), целлюлозных фильтров, ионообменной смолы, гель-фильтрации, магнитных частиц. Процесс включает в себя стадии лизиса, связывания, промывки и элюирования. Метод выбирается исходя из следующих факторов:

  • какой биологический материал используется (эпителиальные клетки, слюна, моча, кровь, волосы, ногти);
  • необходимая степень очистки;
  • как быстро нужен результат;
  • требуемое количество и назначение выделяемого материала (генетическое исследование, клонирование, синтез).

Экстракция при помощи диоксида кремния

К исследуемому образцу добавляют гуанидинтиоцианат, в результате чего все соединения, кроме нуклеиновой кислоты, денатурируют (связываются между собой). Далее осуществляется отмывка от других клеточных компонентов, а полученная молекула помещается в специальный раствор. Эта методика подходит для применения при наличии достаточного количества биологического материала. Она экономичная, быстрая, автоматизированная.

Выделение через целлюлозный фильтр

Используется специальный целлюлозный фильтр, пропитанный связывающими нуклеиновые кислоты буферами. Белки при этом денатурируются, а выделенная ДНК защищена от воздействия ультрафиолета и нуклеаз. Она имеет высокое качество и может храниться при комнатной температуре длительное время. Процедура происходит оперативно, возможна автоматизация процесса. Но такой способ достаточно дорогой и может применяться только для жидких образцов.

Экстракция магнитными частицами

В исследуемый образец добавляются магнитные шарики, которые связывают ДНК, и лизирующее средство. В процессе очищения оставшиеся клеточные элементы вымываются, а выделенная молекула элюируется низкосолевым буфером. По сравнению с другими способами этот довольно дорогостоящий, но он позволяет получить большое количество материала, причем очень высокого качества.

Выделение посредством гель-фильтрации

Данный способ дает возможность быстро разделить молекулы в соответствии с их размерами. Используемый гель представляет собой молекулярную сетку, при прохождении через которую биологический материал расщепляется. После этого проводится очищение фенолом или этилом.

Экстракция ионообменной смолой

Образец помещается в пробирку, к нему добавляется ионообменная смола, после чего в течение 30 минут производят инкубацию, а после нее – кипячение и центрифугирование. Это самая недорогая и быстрая процедура, полностью автоматизированная. Но она дает недостаточно хорошую очистку, а молекула, выделенная таким способом, пригодна для исследования в течение определенного промежутка времени, после чего она разрушается.

Если вы планируете сделать тест ДНК и хотите быть уверены в его достоверности, воспользуйтесь услугами нашей компании «Генотест».